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          技術專欄

          ELISA實驗中標曲怎么做?
          供稿:市場部發布時間:2024-01-19瀏覽量:472次
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          曲線繪制的使用工具

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          以下所述中使用的曲線繪制軟件為Curve E xpert1.4, 各位老師們如有需要即可點擊此鏈接下載自行下載使用;

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          標準曲線的繪制
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          可以采用各種繪圖軟件來繪制 ELISA 標準曲線,下面以“Curve Expert1.4”軟件為例,繪制 ELISA 標準曲線的方法如下;

          1.啟動“Curve Expert”

          2.X 軸輸入標準品的 OD 值(雙抗夾心輸入 OD-空白值),Y 軸輸入所對應的濃度值,如圖:

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          3.單擊[運行]按鈕,出現如下對話框

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          4.單擊[ok]按鈕,出現如下兩個對話框,關閉下面一個對話框

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          5. 在對話框的右上角出現一些曲線的名稱,從“1”開始依次點擊曲線名稱,在右下角會出現相應擬合的曲線。(一般選擇第一個多項式擬合)

          6. 根據擬合的曲線選取 ELISA 擬合度最佳的曲線雙擊,出現如下對話框:注意:選擇系數(即“r”值)最好的曲線方程來進行運算。

          在下面的對話框 右上角有“r”值,當“r”值越接近 1 擬合度越好

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          7.按[Ctrl]鍵+[L]鍵,出現如下對話框:

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          8.輸入標準的 OD 值,單擊[Calculate]按忸,即可得到待測蛋白的實際含量(標本稀釋了 N 倍,運算出的數值應在乘以 N)。?

          9. 如想得到 ELISA 擬合曲線的方程,可在步驟 6 的對話框空白處右擊,選擇”Information”

          10. 得到如下對話框:點擊“Copy”

          在你需要的位置粘貼即可得到如下數據:

          Rational Function: y=(a+bx)/(1+cx+dx^2)?

          Coefficient Data:?

          a = -21.531017?

          b = 212.05019?

          c = -0.24054479 d = 0.018060778?

          11. 修改作圖中 X,Y 坐標軸高度以及相關屬性 選擇步驟 9 所示圖中的第二排“Graph Properties”,修改好后點擊 OK 保存

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          做標準曲線時有幾個問題需要注意

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          注意事項一

          1、樣品的濃度是根據標準曲線計算出來的,所以要嚴格按照說明書指示進行操作,標準曲線能直接反映操作是否準確。

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          注意事項二

          2、樣品濃度較高時,應當稀釋樣本再進行檢測,樣品OD值在標準曲線范圍內才能得到更準確的計算結果。

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          注意事項三

          3、標準曲線的樣品數一般為7個點(除去零孔/背景孔),但至少要保證有5個點,當標曲有個別孔讀數值不正常時,可以摳除。

          注意事項四

          4、夾心法的標曲制作和樣本濃度計算時需要減掉0孔背景值,競爭法不需要。

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          注意事項五

          5、做出的標準曲線相關系數因實驗要求不同而有所變動,但一般來說,相關系數R至少要大于0.99,R值越接近1,說明標曲擬合越好。

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